病毒是一種個體微小結(jié)構(gòu)簡單，只含一種核酸（DNA或RNA），必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型生物。

病毒是一種非細(xì)胞生命形態(tài)，它由一個核酸長鏈和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成，病毒沒有自己的代謝機(jī)構(gòu)，沒有酶系統(tǒng)。因此病毒離開了宿主細(xì)胞，就成了沒有任何生命活動、也不能獨立自我繁殖的化學(xué)物質(zhì)。

常見的病毒樣本保存液的設(shè)計或針對于核酸的保護(hù)，或指向病毒功能蛋白的保護(hù)。

針對核酸的樣本保存液中，通常含有DNase/RNase和其他功能酶的抑制作用，破壞功能蛋白，這一類病毒樣本保存緩沖液更適用于pcr方法或其他分子檢測方法的使用。

圖片來源：病毒保存液滅活和非滅活有哪些區(qū)別？

而主要保護(hù)功能蛋白的病毒樣本保存液，對于核酸的保護(hù)效果不佳，更適用于病毒抗原或抗體的檢測，比如elisa或膠體金、熒光等快速檢測的使用。

1、滅活型病毒保存液和非滅活型病毒保存液

病毒保存液主要分滅活型病毒保存液和非滅活型病毒保存液。

1）非滅活型病毒保存液

非滅活型的病毒保存溶液不含裂解鹽，可以保持病毒的體外活性以及抗原和核酸的完整性，保持不分解病毒蛋白包膜，并保持病毒樣品的原始性程度。除核酸提取和檢測外，它還可用于病毒培養(yǎng)和分離。

非滅活病毒保存液的成分主要以Hank's液為基礎(chǔ)，在Hank's液基礎(chǔ)上，添加了很多抑菌成分、冷凍保護(hù)劑等成分。

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Hank's平衡鹽溶液（Hank's Balanced Salt Solution, HBSS）是細(xì)胞分離或培養(yǎng)中常用的磷酸鹽緩沖液之一，主要成分包括NaCl、KCl、KH₂PO₄、Na₂HPO₄、NaHCO₃、CaCl₂、MgCl₂、MgSO₄和葡萄糖。Hank's平衡鹽溶液常用于組織塊的漂洗、細(xì)胞的洗滌、細(xì)胞或組織的運輸、其他試劑的配制以及作為細(xì)胞計數(shù)的稀釋液等。

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平衡鹽溶液（Balanced Salt Solution, BSS）也叫生理溶液（Physiological Solution），是集緩沖液的緩沖力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營養(yǎng)供應(yīng)特點于一體的，具有維持滲透壓、保持PH穩(wěn)定以及提供簡單的營養(yǎng)的作用，可滿足體外實驗中組織、器官或細(xì)胞的生存和代謝的基本需要。一些平衡鹽溶液中還添加了少量酚紅，用以指示溶液的酸堿度變化。

2）滅活型病毒保存液

滅活型病毒保存液添加有裂解鹽，可以降解樣本病毒，使其失去活性，可以有效地防止操作員繼發(fā)感染。

保存液里面含有的Tris、裂解鹽、EDTA等主要目的是裂解核酸而釋放出核酸，從而通過后續(xù)的實時熒光RT-PCR進(jìn)行核酸檢測，以此判斷樣本是否含病毒特征核酸，即是否感染病毒。

它還包含抑制劑可以防止病毒核酸降解，以便進(jìn)行后續(xù)檢測，并且可以在室溫下保存相對較長的時間，從而節(jié)省了病毒樣品的保存和運輸成本。

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滅活型病毒保存液則使用上更安全，操作環(huán)境要求也不用那么嚴(yán)格。

3、非滅活型病毒保存液的成分及作用

目前研究的病毒保存液的成分主要為Hank's液基礎(chǔ)、慶大霉素、真菌抗生素、BSA（牛血清白蛋白第五組分）、生物緩沖劑HEPES、氨基酸、冷凍保護(hù)劑、甘油等多種組分

1）純化水

純化水，H?O。純化水在病毒保存液中的主要作用是作為溶劑，提供一個適宜的介質(zhì)用于稀釋和混合其他成分，同時也有助于維持保存液的pH值在一個理想的范圍內(nèi)，這有助于維持病毒的穩(wěn)定性。

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2）葡萄糖

葡萄糖，分子式C?H??O?。葡萄糖在病毒保存液中的添加主要是為了提供一個穩(wěn)定的能量來源，幫助維持樣本中可能存在的細(xì)胞的生存狀態(tài)，從而間接保護(hù)病毒的活性。

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葡萄糖也可以幫助調(diào)節(jié)保存液的滲透壓，維持一個適宜的環(huán)境，防止細(xì)胞因環(huán)境壓力變化而發(fā)生破裂或收縮。

3）甘油

甘油，分子式C?H?O?。甘油在病毒保存液中的添加主要是為了提供冷凍保護(hù)，防止樣本在低溫保存和運輸過程中病毒受損，具有穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用，可以防止病毒蛋白在低溫或者是不穩(wěn)定環(huán)境中變性或聚集，從而保持病毒的感染能力。

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4）氯化鈉

氯化鈉，NaCl。氯化鈉在病毒保存液中的添加主要是為了調(diào)節(jié)溶液的滲透壓和離子強(qiáng)度，從而提供一個適宜的環(huán)境以維持病毒的穩(wěn)定性和活性。

圖片來源：氯化鈉結(jié)構(gòu)

5）蔗糖

蔗糖，分子式C??H??O?? 。蔗糖在病毒保存液中的添加通常是為了提供冷凍保護(hù)和穩(wěn)定病毒顆粒，從而保持病毒的結(jié)構(gòu)和感染活性。

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6）檸檬酸鈉

檸檬酸鈉，分子式是C?H?Na?O?。檸檬酸鈉在病毒保存液中的添加主要是因為它的緩沖能力和對金屬離子的螯合作用。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

7）十二烷基肌氨酸鈉

十二烷基肌氨酸鈉，分子式C??H??NNaO?。十二烷基肌氨酸鈉在病毒保存液中主要用于增強(qiáng)病毒核酸的提取效率，減少病毒的感染性，以及提高樣品的處理性能，它是病毒學(xué)研究和診斷中常用的添加劑之一。

8）酚紅

酚紅能夠通過顏色的變化來指示溶液的pH變化。在酸性條件下，酚紅呈現(xiàn)黃色；在中性和堿性條件下，它呈現(xiàn)紅色到粉紅色。這種顏色變化可以幫助研究人員監(jiān)控保存液的pH狀態(tài)，確保其處于適宜病毒保存的范圍內(nèi)。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

雖然酚紅的主要功能是作為pH指示劑，但它本身并不調(diào)節(jié)pH值，而是用來監(jiān)測和指示pH狀態(tài)。酚紅對細(xì)胞有一定毒性，在一些特定的實驗設(shè)置中，如果存在對酚紅敏感的應(yīng)用（例如某些細(xì)胞培養(yǎng)或分子生物學(xué)實驗），可能需要考慮使用不含酚紅的保存液或培養(yǎng)基。

9）慶大霉素、真菌抗生素

多種抗生素聯(lián)合，具有抗細(xì)菌和抗真菌的作用。

圖片來源：慶大霉素-醫(yī)學(xué)百科-百科知識

10）牛血清白蛋白

牛血清白蛋白（BSA）作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點為4.7。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用，可在病毒的蛋白質(zhì)外殼形成一種保護(hù)膜，使其不易分解，保證病毒的完整性，提高分離率；還可在western blot中作為Blocking agent；在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性。

11）氨基酸

為病毒存活提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)。

圖片來源：蛋白質(zhì)分子中氨基酸的排列順序-掛云帆

4、滅活病毒保存液的成分及作用

滅活病毒保存液相對于非滅活病毒保存液，主要是多了硫氰酸胍。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

a.病毒裂解

硫氰酸胍是一種有效的裂解劑，可以破壞病毒的蛋白質(zhì)外殼和脂質(zhì)包膜，從而釋放出病毒的遺傳物質(zhì)（RNA或DNA）。這一點對于后續(xù)的病毒核酸的提取和分析至關(guān)重要。

b.核酸穩(wěn)定性

在裂解病毒并釋放出遺傳物質(zhì)后，硫氰酸胍有助于穩(wěn)定這些敏感的分子，防止它們在樣品處理和存儲過程中被降解。硫氰酸胍通過破壞核酸降解酶的活性來保護(hù)核酸免受破壞。

c.抑制核酸酶活性

硫氰酸胍能夠有效抑制核酸酶的活性，這些酶如果活躍會迅速降解釋放出的RNA或DNA。通過抑制這些酶，硫氰酸胍?guī)椭３趾怂岬耐暾?，這對于確保病毒檢測的準(zhǔn)確性和靈敏度至關(guān)重要。

圖片來源：Ribonuclease A - 生化試劑 - 西典實驗

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